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公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱(chēng)： 大鼠正常腎成纖維細(xì)胞直銷(xiāo)
簡(jiǎn)稱(chēng)：NRK-49F

種屬：大鼠

來(lái)源：腎；成纖維細(xì)胞；自發(fā)永生

培養(yǎng)基：EMEM

狀態(tài)：貼壁

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

貨號(hào)：AE0331
基本特性：
（ 1 ）組織來(lái)源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗(yàn)證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

使用方法：
收到細(xì)胞大鼠正常腎成纖維細(xì)胞直銷(xiāo)后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀(guān)察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)操作：
1、培養(yǎng)瓶預(yù)包被。試驗(yàn)前一天預(yù)包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺(tái)吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無(wú)菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無(wú)菌條件下迅速取出大鼠主動(dòng)脈。
3、材料預(yù)處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復(fù)洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無(wú)菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細(xì)胞：將縱向剪開(kāi)， 內(nèi)膜面向上，無(wú)菌鑷子沿中軸方向反復(fù)刮動(dòng)內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細(xì)胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的，繼續(xù)刮動(dòng)分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應(yīng)；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復(fù)消化3次。
8、收集重懸細(xì)胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計(jì)數(shù)細(xì)胞。
9、培養(yǎng)細(xì)胞密度：調(diào)整細(xì)胞密度以5 × 105個(gè)/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。
1-Cyclopropyl-6,7-difluoro-1,4-dihydro-8-methoxy-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid ethyl ester  中文名：  分子式：C16H15F2NO4    幽門(mén)螺旋桿菌球蛋白Y   英文名稱(chēng)：   Human Helicobacter pylori IgY   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   HP-IgY

1-Cyclopropyl-6,7-difluoro-1,4-dihydro-8-methoxy-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid  中文名：  分子式：C14H11F2NO4    病毒抗體IgG   英文名稱(chēng)：   Human Hepatitis A Virus IgG   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   HAV IgG

1-Chloroethyl cyclohexyl carbonate  中文名：  分子式：C9H15ClO3    病毒e抗原   英文名稱(chēng)：   Human Hepatitis B e Aigen   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   HBeAg

1-chloro-6-(5-ethynylthiophen-2-yl)hexa-3,5-diyn-2-ol  中文名：  分子式：C12H7ClOS    鏈球菌(ST)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>)   48T

1-Chloro-6-(5-(prop-1-ynyl)thiophen-2-yl)hexa-3,5-diyn-2-ol  中文名：  分子式：C13H9ClOS    病毒(MV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>)   48T
小鼠調(diào)節(jié)蛋白   英文名稱(chēng)：   thrombomodulin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   TM  Folic acid  中文名：葉酸  分子式：C19H19N7O6 

小鼠素elisa試劑盒   小鼠素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠素試劑盒、小鼠素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Metronidazole  中文名：甲硝唑  分子式：C6H9N3O3  度：99.0%

小鼠素B2(TXB2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Minoxidil  38304-91-5  中文名：米諾地爾  分子式：C9H15N5O  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠素B2(TXB2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Campsiketalin  中文名：  分子式：C10H20O4 

小鼠素A2（TXA2）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Minoxidil  38304-91-5  中文名：米諾地爾  分子式：C9H15N5O
2-Benzothiazolyl diethyldithiocarbamate  95-30-7  中文名：二乙基二硫代氨基甲酸 2-苯并噻唑酯  分子式：C12H14N2S3    I 型膠原 N 末端肽 (X)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

p-Anisoin  119-52-8  中文名：對(duì)茴香偶姻  分子式：C16H16O4     (NO)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  

Benzoin  119-53-9  中文名：安息香  分子式：C14H12O2    神經(jīng)生長(zhǎng)因子   英文名稱(chēng)：    nerve growth factor    規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   NGF

3-Benzalphthalide  575-61-1  中文名：3-亞芐基苯酞  分子式：C15H10O2    神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體   英文名稱(chēng)：    nerve growth factor  receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   NGFR

L-Aspartic acid  56-84-8  中文名：L-天門(mén)冬氨酸  分子式：C4H7NO4    中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)性載脂蛋白   英文名稱(chēng)：   Neuophil gelatinase-associated lipocalin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   NGAL
大鼠正常腎成纖維細(xì)胞直銷(xiāo)人肌聯(lián)蛋白   英文名稱(chēng)：   Human titin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   TTN  Rivaroxaban  366789-02-8  中文名：利伐沙班  分子式：C19H18ClN3O5S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人骨形成蛋白(BMPs)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Thiamphenicol  15318-45-3  中文名：甲砜霉素  分子式：C12H15Cl2NO5S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人骨特異性堿性0酸酶B(ALP-B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  3,3'-Sulfonyldianiline  中文名：3,3'-二氨基二苯砜  分子式：C12H12N2O2S  度：98.0%

人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Benzothiazolyl diethyldithiocarbamate  95-30-7  中文名：二乙基二硫代氨基甲酸 2-苯并噻唑酯  分子式：C12H14N2S3 

人骨鈣素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              3,3'-Sulfonyldianiline  中文名：3,3'-二氨基二苯砜  分子式：C12H12N2O2S
操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。