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10×Tris-Glycine-SDS電泳緩沖液注意事項

發(fā)表時間:2022-11-03
10×Tris-Glycine-SDS電泳緩沖液注意事項:
1) 由于細(xì)胞凋亡是一個快速的過程,建議樣品在染色后1小時之內(nèi)進行分析。
2) 對于貼壁細(xì)胞,消化是一個關(guān)鍵步驟。貼壁細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時如有漂浮細(xì)胞,需收集漂浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞后合并染色。處理貼壁細(xì)胞時要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。*消化時間過短,細(xì)胞需要用力吹打才能脫落,容易造成細(xì)胞膜的損傷,PI攝入過多;消化時間過長,細(xì)胞膜同樣易造成損傷,甚至?xí)?br /> 影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合。消化時將*鋪滿孔板底后,輕搖時*與細(xì)胞充分接觸,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段時間,待細(xì)胞間空隙增大,瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA,EDTA會影響Annexin V與PS的結(jié)合。
3) 實驗中如需要固定細(xì)胞,比如在檢測凋亡的同時檢測細(xì)胞周期,只能選用Annexin V-FITC,而不能選用Annexin V-EGFP,因為在固定過程中EGFP會變性導(dǎo)致喪失激發(fā)熒光的能力。固定需要先將細(xì)胞與Annexin V-FITC進行孵育,并用binding buffer洗掉未結(jié)合的Annexin V-FITC。因為固定過程中細(xì)胞通透性增加會產(chǎn)生細(xì)胞碎片,可以和Annexin V結(jié)合,對結(jié)果產(chǎn)生干擾。
4) 如果樣品來源于血液,請務(wù)必除去血液中的血小板。因為血小板含有PS,能與Annexin V結(jié)合,從而干擾實驗結(jié)果。可以使用含有EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。
5) 試劑在開蓋請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。

6) Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。

紅細(xì)胞陰離子交換蛋白1抗體
腦特定蛋白Brn3B抗體
Bcl-2同源結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
骨形態(tài)發(fā)生蛋白4抗體
腦和急性白血病胞漿蛋白抗體
骨髓基質(zhì)干細(xì)胞抗原2抗體
組蛋白相關(guān)Bmi1抗體
乳腺癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體
大腦富含鳥苷酸激酶相關(guān)蛋白抗體
腦富含膜附著信號蛋白1抗體
卵黃狀黃斑病蛋白3抗體
卵黃狀黃斑病蛋白抗體
卵黃狀黃斑病蛋白4抗體
炭疽桿菌菌體蛋白抗體
EBV立即早期基因BRLF1抗體
腦表達(dá)X連鎖蛋白4抗體
B淋巴細(xì)胞新型蛋白1抗體
核突觸蛋白β抗體
BTRC2蛋白抗體
BEND3蛋白抗體
BEND4蛋白抗體
BEND6蛋白抗體
胎兒阿茲海默病抗原/核小體重塑因子抗體
巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白2抗體
巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白5抗體
巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白4抗體


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