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磷酸化轉錄因子SOX9蛋白抗體的生物素化標記實驗要點

發表時間:2022-03-24

磷酸化轉錄因子SOX9蛋白抗體的生物素化標記實驗要點:
1.如在反應混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標記反應。因此,蛋白質在反應前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質之間的分子比按蛋白質表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當則影響標記的效率,應先用幾個不同的分子比來篩選最適條件;
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結合位點可能因此被封閉,導致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;
5.當游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結合位點時,或位于酶的催化位點時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結合力或活性;
6.生物素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結合;
7.交聯反應后,應充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結合產生競爭作用;

8.在細胞的熒光標記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導致高本底。

AGPHD1 氨基糖苷類磷酸結構域蛋白抗體
ASGPR1 唾液酸糖蛋白受體1抗體
ARSF 芳香基硫酸酯酶F抗體
AKAP5 A激酶錨定蛋白5抗體
ATXN3L 小腦脊髓共濟失調蛋白3抗體
ASTE1 ASTE1蛋白抗體
phospho-APG4B(Ser309) 磷酸化自噬相關蛋白4B抗體
AFAP 微絲相關蛋白1抗體
ADORA1 腺苷A1A受體抗體
ARSB 芳基硫酸酯酶B抗體
ABAT γ氨基丁酸轉氨酶抗體
A2BP1 共濟失調蛋白2結合蛋白1抗體
ADAM17 腫瘤壞死因子α轉換酶
ARNT2  芳香烴受體核轉錄蛋白2抗體
ABH8 AlkB同源蛋白8抗體
ABI3BP ABI基因家族成員3結合蛋白抗體
ARHGAP20 Rho GTP酶激活蛋白20抗體
ASB10 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族10抗體
ALDH1L1 乙醛脫氫酶1蛋白家族L1抗體
Axin 2 軸抑制蛋白2抗體
ANGPTL6 血管生成素相關蛋白6抗體
AMH Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體
EphA8 酪氨酸蛋白激酶受體A8抗體
Acetoacetyl-CoA synthetase 脂肪酰輔酶A家族成員1抗體
ARNTL2 芳香烴受體核轉錄蛋白樣2抗體
phospho-AANAT (Thr29) 磷酸化芳香胺N-乙酰化轉移酶抗體
ABLIM1 肌動蛋白結合蛋白1抗體
AMIGO2 粘附分子IgG樣結構域蛋白2抗體


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