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人前顆粒體蛋白ELISA試劑盒操作流程描敘

發(fā)表時間:2021-08-10
人前顆粒體蛋白ELISA試劑盒操作流程描敘:
         1、將要進行實驗的版孔進行設(shè)定好,標準品 5 個點,每個點設(shè)定平行,需要用到 10 個孔,空白只需 1 個孔。剩下孔可以做為樣本孔
         2、 稀釋標準,準備好 5 個 EP 管,然后在每個 EP 管中加入 150 微升標準稀釋液,編上編碼,分別為 1,2,3,4,5,在 1 號管中加入 150 標準品,用槍頭反復吹打 10 次左右(注意控制幅度不要過大容易產(chǎn)生氣泡)如果有渦旋儀可以在渦旋儀上渦旋 5 秒左右,然后換槍頭,在 1 號管中取 150 微升加入到 2 號管,后面過程一次類推。最后稀釋完,前面 4 個管中每管液體在 150 微升,5 號管為 300 微升。濃度是從大到小。
         3、 標準、樣本、空白加樣:標準是每個濃度點 2 個孔(做平行),每孔加入 50 微升,加樣過程中注意換槍頭,樣本孔中每孔加入 50 微升,加樣過程中注意換槍頭,空白孔加入 50 微升標準稀釋液或者樣本稀釋液。特別要說明的是,標準加樣和樣本加樣盡量控制在 15 分鐘內(nèi)加完,如果時間拖的太長,會導致前面孔先反應(yīng)后面孔才開始反應(yīng),這樣數(shù)值偏差過大。加完樣后蓋上封板膜,至 37 攝氏度孵育 30 分鐘.

        

4、洗版,在孵育過程中可以將洗滌液配好,20 ml30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水或者去離子水定容到 600 ml 即可。每孔加入 250-300 微升的洗滌液(不要漫過版孔),(如果有震蕩儀的話,可以講板子放入震蕩儀上 5 秒左右,然后靜止三十秒,沒有請忽略次過程)將板子在桌子上晃動 5 秒左右,然后靜置 30 秒,甩干,拍板。說明:甩干過程盡量要快,1 秒內(nèi)就可以完成,不要慢慢傾斜倒掉液體,直接翻板甩掉液體即可。拍板過程需要在桌子上墊一層吸水紙或者濾紙,版孔朝下拍幾下,拍干區(qū)別主要看吸水紙和濾紙上沒有明顯的水漬為完成。

         5、每孔加入 50 微升的酶標試劑,此處在空白孔中不需要加(空白孔為空),孵育 30 分鐘。
         6、  洗版同步驟 4
         7、顯色,先每孔中加入 50 微升的顯色 A 液,然后每孔中加入 50  微升顯色  B  液。避光 37 攝氏度顯色 15 分鐘
         8、終止,每孔加入 50 微升的終止液,注意,加完終止液必須在 15  分鐘內(nèi)讀數(shù),超過時間讀數(shù)無效。在規(guī)定時間內(nèi)讀數(shù)都是有效的。
         9、至此,整個實驗結(jié)束。


需要額外提醒的是:


       在做完整個實驗過儀器之前,儀器最好預(yù)熱半小時,這個計算好時間,也可以直接將儀器一直開著,直到整個實驗結(jié)束。
       在加液過程中不要使槍頭觸及到板子底部,一般槍頭都懸空,可以將槍頭靠在孔邊緣,但槍頭尖懸空,如果槍頭上殘留液體看整體多少量,不要吹打下去。特別忌諱在版孔內(nèi)壁流向版孔。整個加液過程不要產(chǎn)生氣泡。(洗滌液除外)

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